Масове розведення златоглазки звичайної

На сьогодні існує ряд технологій масового розведення златоглазки звичайної. Всі технології розведення цього хижака забезпечують отримання великої кількості цього ентомофага при відносно незначних витратах. Масове розведення златоглазки звичайної передбачає виконання таких технологічних операцій: отримання корму для личинок златоглазки (яєць зернової молі або інших комах, а також штучних поживних середовищ), інкубацію яєць хижака, індивідуальне або групове виховання личинок златоглазки, зміст дорослих комах, отримання яєць, накопичення і збереження біоматеріалу. Згідно екологічних параметрів виду на кожному етапі технології розведення необхідно створювати певні умови температури і вологості повітря, а також забезпечувати ентомофага якісним кормом. Більшість виробничих біолабораторій розводять златоглазок, використовуючи в якості корму для личинок яйця зернової молі (Sitotroga cerealella).

Розведення златоглазки звичайної на яйцях зернової молі

Численними дослідженнями вітчизняних і зарубіжних вчених встановлено, що яйця зернової молі є повноцінним замінником природного корму личинок хижака. Для вигодовування личинок зазвичай використовують як життєздатні (свіжі) яйця сітотрогі, так і ті, що втратили життєздатність в результаті їх тривалого зберігання при низьких температурах. Встановлено, що їх харчова цінність не знижується навіть при тривалому зберіганні (до трьох місяців). Це дозволяє накопичувати їх.

Масове розведення златоглазки звичайної яйцях зернової молі проводиться як лабораторним, так і механізованим способом з використанням спеціального промислового обладнання.

Лабораторний спосіб масового розведення златоглазки звичайної

Технологія лабораторного розведення златоглазки включає наступні операції: отримання маточного культури златоглазки, інкубацію яєць, індивідуальне або групове виховання личинок, одержання коконів хижака, зміст дорослих комах і зберігання біоматеріалу.

Маткова культура златоглазки

Лабораторне розведення починається з придбання маточного матеріалу, який можна отримати в інших біолабораторіях або биофабриках або зібрати безпосередньо в природі. Збір златоглазки краще робити в кінці літа, отлавливая дорослих комах на світло, в тому числі ультрафіолетове, або шляхом косіння сачком на польових культурах, де в масі знаходиться тля, або струшуючи в сачок з деревної рослинності. Перед зимівлею дорослі особини зустрічаються на плодових культурах, в садах і в парках, на деревах і чагарниках, де живуть до відходу на зимівлю в листопаді. Зібрані в другій половині жовтня дорослі особини златоглазки вже починають входити в діапаузу і змінювати своє забарвлення з інтенсивно-зеленого до блідо-зеленого, а потім зі зниженням температури вони стають жовто-зеленими з коричнево-червоними плямами на тілі.

інкубація яєць

Для отримання одновікових личинок хижака свежеотложенние (в межах доби) яйця златоглазки поміщають в термостат, де вони при температурі 25 ° С і відносній вологості повітря 80 проходять період інкубації. У зв`язку з тим, що у личинок златоглазки проявляється сильно виражений канібалізм, за день до їх відродження, тобто через дві доби після розміщення на інкубацію, яйця златоглазки розфасовують в спеціально виготовлені коміркові садки для індивідуального виховання личинок. Останній складається з укладання, виконаної з щільного паперу у вигляді сот, дном якого служить млиновий газ, натягнутий на дерев`яну рамку, і кришки - скляної пластинки. У зібраному вигляді кожна клітинка в поєднанні з дном і кришкою утворює ізольований індивідуальний сад розміром 7 × 12- 5,0 × 12,5 мм. Можуть використовуватися і сади іншої конструкції.

Розфасовку підготовлених яєць проводять за допомогою розсіювання, використовуючи для цього просте пристосування типу перечниці, з розрахунку два яйця на одну клітинку. Для заповнення одного саду потрібно близько 800 яєць, відповідає масі 34,8 мг.

Догляд за личинками

За весь період індивідуального розвитку личинок проводять їх триразове годування. Годування личинок златоглазки здійснюють шляхом розсіювання яєць сітотрогі, використовуючи таке ж пристосування, що і під час розфасовки яєць златоглазки. Першу порцію яєць зернової молі вносять одночасно з яйцями ентомофага з розрахунку 2 мг на одну клітинку. Потім укладання накривають склом і сад поміщають в термостат з температурою 25 ° С. Друге годування личинок проводять після досягнення другого віку, або через п`ять днів після першого. До сих пір їх ненажерливість сильно зростає, тому дозу яєць збільшують до 14 мг на одну клітинку. На відміну від першого при другому годуванні, личинок хижака попередньо анестезують за допомогою вуглекислого газу, а яйця сітотрогі рівномірно розсіюють на попередньо змащене медом скло і накривають ним укладання саду. Для прискорення проведення цієї операції рекомендується мати на кожен сад два скла. Це дозволяє заздалегідь підготувати корм для личинок ентомофага і в процесі годування тільки змінювати скло на садах. Заздалегідь підготовлені пластинки з кормом зберігають в холодильнику три дні і більше.

Третю порцію яєць дають, коли личинки досягають третього віку, тобто через три дні після другого. Норму яєць в цей період збільшують до 16 мг на одну клітинку, або 6,4 г на сад. При годуванні личинок златоглазки для дозувань корми зручно використовувати заздалегідь підготовлені об`ємні мірки з місткістю, відповідному першому, другому, третьому годівлі. Через три-п`ять днів після третього годування личинки закінчують харчування і заляльковуються. При дотриманні режиму виховання з кожного саду можна отримати 450 коконів златоглазки.

Запропоновано груповий метод виховання личинок златоглазки. У личинок першого та другого віку при певній щільності жертви і оптимальній температурі і вологості повітря, а також при достатньому забезпеченні їх кормом, канібалізм хижаків можна звести до мінімуму. Наприклад, при утриманні личинок ентомофага в звичайних півлітрових банках по 100 особин в кожній можна отримати до 91,7 личинок другого віку. Збільшення щільності златоглазки призводить до підвищення канібалізму, і вихід її різко знижується. Груповий метод змісту личинок златоглазки виправданий тільки при отриманні личинок другого віку. Для отримання імаго цей спосіб неприйнятний, так як личинки третього віку поїдають лялечок.

Догляд за імаго і отримання яєць

Через шість-сім днів після утворення коконів їх переносять в спеціальні садки для виховання дорослих комах. Сади виконані у вигляді контейнерів циліндричної форми діаметром 30 см і висотою стінки 10 см. Для їх виготовлення використовують винипласт, дахове залізо або інший матеріал. Як днище застосовують млиновий газ з розміром осередку 1,5 × 1,5 мм. Зверху сад покривають темною щільною тканиною або папером. Млиновий газ, папір або тканину закріплюються на саду обручем, що стягується спеціальним гвинтом. На внутрішній частині стінок саду встановлюють власники змінних пластинок з вініпласту, на які наносять краплі корми для комах. У кожному саду можна містити до 200 дорослих особин хижака. Велика скупченість комах в садах призводить до зниження плодючості ентомофагів. Встановлено, що при зміні щільності златоглазки від 85 до 350 особин на один сад плодючість хижака знижується в три рази, причому при оптимальній щільності масове відкладання яєць комахами починається на 10-15 днів раніше, ніж при високій їх щільності.

На плодючість златоглазки великий вплив робить і характер корми імаго. Найбільша репродуктивна здатність у комах спостерігається при годуванні їх вуглеводно-білковою їжею. Висока плодючість у хижаків буває при годуванні самок златоглазки мальтозою в поєднанні з фруктозою, більш низька - при введенні в дієту глюкози і сахарози, при заміні сахарози цукром плодючість комах знижується в 1,5-2,0 рази.

Як джерело вуглеводів при годуванні імаго златоглазки зазвичай використовують мед або цукровий сироп, а білковим кормом служить автолізат пивних дріжджів. До вищезазначеного корму добре додавати 2 -ний розчин перги. Додавання навіть невеликої кількості перги в дієту комах збільшує тривалість їх життя. При годуванні однієї вуглеводної або білковою їжею знижуються біологічні показники ентомофага.

Техніка годування комах полягає в тому, що мед або дріжджовий автолізат наносять на внутрішні стінки вкладок у вигляді рядів крапель, які чергуються. Протягом перших чотирьох-п`яти днів комах годують тільки медом або цукровим сиропом, а потім медом і Автолізат пивних дріжджів, причому кожен з компонентів наносять окремо. Відстань між краплями меду повинна бути близько 3 см. Автолізат наносять на вкладки через кожні два ряди меду. Кількість крапель меду в одному ряду по всій висоті вкладки 10-12, дріжджів - 5-6.

При зміні корму, щоб запобігти розліт комах, їх анестезують. Для цього користуються спеціальним пристосуванням з повітряним отсосом (звичайний побутовий вентилятор встановлюють з нижньої сторони столу з вирізаним по діаметру саду отвором). При включенні вентилятора комахи повітряним потоком притискаються до сітчастого дна садка. В даний час верхню тканину або папір з відкладеними на них яйцями знімають і міняють вкладки.

Яйця збирають, зрізуючи стебла безпечної бритвою. Однак слід враховувати, що при цьому близько 20 з них гине від механічних пошкоджень. Більш зручний спосіб, заснований на розчиненні стеблинок яєць в 0,8 розчині гіпохлориту натрію. Для цього паперовий або тканинний верх садка з яйцями златоглазки занурюють на 4 секунди в водний розчин гіпохлориту натрію, попередньо нагрітого до 24 ° С. Після цього папір або тканину витримують на повітрі протягом 16 секунд і яйця струменем води змивають на густе сито, просушують і використовують за призначенням.

зберігання златоглазки

Для успішного застосування златоглазки важливо накопичити достатній запас хижака, щоб при необхідності мати можливість випуску ентомофага на значні площі. Для цього розроблена методика збереження златоглазки в різних фазах її розвитку.

зберігання яєць. Оптимальними умовами для зберігання яєць златоглазки є температура 5 ° С і відносна вологість повітря 80-90. Для збереження придатні тільки свежеотложенние яйця. Залежно від фази ембріонального розвитку ступінь виживання яєць в процесі зберігання змінюється. Найбільш прийнятне збереження яєць, коли тривалість періоду зберігання становить не більше 20 днів. За цей період 76-96 ембріонів зберігають життєздатність. Більш тривале збереження практичного значення не має, тому що велика частина яєць за цей час втрачає життєздатність. Так, при збереженні яєць протягом 30-35 днів гине 36-50 ембріонів.

зберігання личинок. Як і яйця, личинки златоглазки для тривалого збереження непридатні. При знижених температурах, їх образи та зберігають протягом 30-40 днів. Більш придатні для цього личинки першого віку. Личинки другого і третього віку можна зберігати до 20 днів. При більш тривалому зберіганні знижується їх життєздатність.

зберігання коконів. Зберігають тільки ті кокони, в яких сформувалися лялечки, тобто через сім днів після утворення кокона. Кокони з лялечками, не сформувалися, навіть при 10-денному зберіганні гинуть (30-36). Лялечок зберігають при температурі 2 ° С і відносній вологості повітря 75. Однак найбільший вплив на їх виживання виробляє тривалість зберігання, яка не повинна перевищувати 10 днів. Більш тривале перебування в умовах знижених температур призводить до значної загибелі комах. Так, при збереженні протягом 20 днів життєздатність зберігається лише в 41-52 лялечок.

Зберігання дорослих репродуктивних особин. Кращими умовами для збереження дорослих активних комах є температура 4 ° С і відносна вологість повітря 70-90. Дорослих златоглазок зберігають в круглих ситах або в скляних півлітрових або літрових банках. Для збільшення загальної корисної площі в банки поміщають хрестовину з листового картону, яка розділяє банку на чотири сектори.

Для зберігання використовують молодих комах (самців і самок). У півлітрову банку поміщають до 200 комах, в банках більшою місткістю кількість їх збільшують відповідно до обсягу. Перед початком процесу збереження комах годують протягом п`яти-семи днів медом. У період зберігання ентомофагів періодично (один раз в п`ять днів) підгодовують медом або цукровим сиропом. Комахою, призначеним для зберігання, автолизата дріжджів не дають. Такі умови дозволяють забезпечити тривале збереження ентомофагів (виживаність 85-90) при задовільній їх репродуктивної здатності. Необхідно враховувати, що тривале зберігання активних самок скорочує тривалість їх життя.

Зберігання диапаз імаго златоглазок. Златоглазка звичайна в життєвому циклі має імагінальний діапаузу, цю особливість використовують при зберіганні комах. Для них попередньо створюють умови (короткий день тривалістю 10-12 год протягом 22-34 днів), необхідні для індукції в златоглазки діапаузи. Щоб прискорити процес переходу комах в стан діапаузи, з їхнього раціону в цей період виключають білковий корм і підгодовують тільки цукровим сиропом. У період діапаузи златоглазки не відкладати яєць. Зовні від активних вони різняться забарвленням тіла.

Зберігають диапаз златоглазок при температурі 5 ° С і відносній вологості повітря 70. У період зберігання комах постійно підгодовують сумішшю цукрового сиропу або меду з автолизата пивних дріжджів. Це необхідно для підвищення плодючості хижаків.

Диапаз комахи більш придатні для зберігання, ніж активні особини. Навіть через 150 днів після зберігання виживає більше 70 златоглазок, а з яєць, які вони відклали, відроджується до 93 життєздатних личинок. Реактивує комахи при світловому періоді 16 год і температурі повітря вище 5 ° С.

Технологія механізованого розведення златоглазки звичайної

На основі багаторічних лабораторних досліджень співробітники Узбецького науково-дослідного інституту захисту рослин (м Ташкент) розробили комплект обладнання (лінія) для масового розведення златоглазки. Комплект обладнання складається з обладнання термостатних кімнат з керованим мікрокліматом і трьох одиниць обладнання, призначеного для різних технологічних операцій при розведенні златоглазки.

Призначення, технічні дані та принцип роботи обладнання з масового розведення златоглазки звичайної

Механізована лінія призначена для масового розведення златоглазки звичайною. Вона монтується в лабораторних приміщеннях, в яких мережі змінного електричного струму напругою 220/380 В, 50 Гц, водопровід, вентиляція, каналізація.

Продуктивність цієї механізованої лінії становить 1,0 млн яєць златоглазки на добу. Основні складові частини механізованої лінії по розведенню златоглазки звичайної і основні функціональні показники і призначення окремих її частин наведені в таблиці 1 і 2.

Таблиця 1

Основні складові частини лінії масового розведення златоглазки

Таблиця 2

Основні функціональні показники призначення окремих частин обладнання для масового розведення златоглазки

Установка для дозування корму для личинок златоглазки призначена для дозування корму в осередку гекселя, являє собою каркас із встановленою перфорованої ємністю для корму.

Для того, щоб все личинки златоглазки розвивалися приблизно одночасно, на інкубацію беруть тільки свежеотложенние яйця. Яйця хижака одного збору змішуються з яйцями сітотрогі в співвідношенні 5 мг сітотрогі на одне яйце златоглазки і в розрахунку 17-20 г яєць сітотрогі на один гексель.

Дозувальна плита забезпечує подачу в кожну клітинку гекселя по 10 мг корму. Повторну підгодівлю по 10 мг в кожну клітинку проводять через шість-вісім днів в установці для дозування корму. Через 12-15 днів личинки, завершивши розвиток, заляльковуються в осередках гекселя. Через два-три дні після окукливания личинок, або через 15-17 днів після розкладання яєць, гексель передають на установку для зняття і збору коконів.

Установка для зняття і збору коконів златоглазки призначена для зняття і збору коконів златоглазки з гекселя Рис. 1. Установка забезпечена електроприводом з конвеєрною подачею гекселей. Тиск пневматичної системи видування коконів в межах 3-4 атм. підтримується за допомогою компресора. Внизу конвеєра розташований коконосборнік з газової сітки. Зібрані кокони поміщають в садки для вильоту імаго і їх подальшого утримання.

кліматична кімната призначена для розведення імаго і личинок златоглазки в оптимальних гігротермічної умовах. У ній повинні підтримуватися наступні параметри: температура повітря 26 ± 1 ° С, відносна вологість повітря 70 ± 5, фотопериод 10-18 год.

Технологічний процес виробництва златоглазки. Технологія механізованого розведення златоглазки складається з наступних основних виробничих процесів:

1. Збір природних популяцій ентомофага.
2. підготовка корму.
3. Зміст дорослих комах в садках або банках.
4. Збір яєць златоглазки.
5. Інкубація яєць златоглазки.
6. Індивідуальне вирощування личинок в гекселях.
7. Зняття і збір коконів златоглазки.
8. Розміщення коконів в банки.
9. відтворення біоматеріалу.
10. Зберігання біоматеріалу до використання.

Імаго златоглазки містять в скляних трилітрових банках по 150 шт. або в спеціальних садках по 3,5 тис. шт. Банки або садки поміщають на стелажі в термостатно кімнаті з регульованим фотоперіодом або в кліматична шафа. Оптимальна температура змісту златоглазки 24-26 ° С, відносна вологість повітря 65-70. Щодня імаго ентомофага підгодовують медом і Автолізат пивних дріжджів. У банки закладають смужки темної бавовняної тканини, на які самки златоглазки відкладають яйця. При утриманні златоглазки в банках через день смужки з відкладеними на них яйцями златоглазки видаляють з банки і закладають чисті смужки, з частини смужок акуратно ножицями зрізають яйця златоглазки, інші яйця представляють товарну продукцію. Зрізані яйця златоглазки змішують з яйцями сітотрогі в співвідношенні 5 мг яєць сітотрогі на одне яйце златоглазки і в розрахунку 17-20 г яєць сітотрогі, змішаних з яйцями златоглазки у зазначеній пропорції, засипають на дозировочную плиту установки для дозування корму. Після засипки дози яєць разом з кормом в спеціальний пристрій - гексель, його закривають кришкою. Гекселі поміщають на спеціальні стелажі (Рис. 2) В термостатна кімнату з регульованим фотоперіодом при температурі 24-26 ° С, де утримують протягом 15-17 днів.

Через сім днів після закладки, проводиться друге підживлення личинок златоглазки дозою 17-20 г яєць сітотрогі на один гексель. Через 15-17 днів відкривають кришки гекселей і збирають кокони златоглазки на установці для зняття коконів (Рис. 1) І по 150 шт. розкладають в банки або садки. Личинок, які не встигли окуклітся, розкладають в пробірки по 1 екз. і підгодовують яйцями сітотрогі до їх окукливания. Після початку вильоту імаго процес відтворення повторюють. Один раз в чотири-п`ять днів банки з імаго златоглазки змінюють на чисті, так як личинки відроджуються з яєць, відкладених на стінках банок, проявляють канібалізм і поїдають свежеотложенние яйця ентомофага.

Розведення златоглазки звичайною на штучних поживних середовищах

Найбільш перспективними кормовими субстратами для личинок златоглазки звичайної є Мікроінкапсульовані поживні середовища, які за фізичними властивостями і біохімічним складом імітують природну їжу хижака.

Розроблено рецептуру декількох рідких штучних поживних середовищ для виховання личинок златоглазки і установку для упаковки поживних середовищ в мікрокапсули. Використання Мікроінкапсульовані штучних поживних середовищ дозволяє скоротити витрати яєць зернової молі на 90-92 і значно знизити загальні витрати на розведення златоглазки.

Види штучних поживних середовищ і технології їх приготування

Відомо, що златоглазка звичайна найбільш ефективно використовується в біологічній боротьбі з попелицями в фазі личинок другого віку. Для годування личинок використовуються кілька видів поживних середовищ (табл. 3).

Таблиця 3

Рецептура штучних поживних середовищ для личинок златоглазки звичайної

Живильні середовища (I-III) рекомендуються для харчування личинок з моменту відродження до першої линьки і на початку другого віку. Ці середовища цілком взаємозамінні і використовуються в залежності від існування тих чи інших компонентів в биолаборатории. Середа IV рекомендується для виховання личинок златоглазки другого і третього століть під час відтворення лабораторних популяцій златоглазки.

Отримання ферментативного гідролізату казеїну

Приготування 2-го розчину казеїну. Казеїн (30 р) перемішують з 1500 мл 0,01 н розчину КОН при 40 ° С протягом трьох годин. Величину рН контролюють кожні 15хв і підтримують в межах рН 8 додаванням по краплях 0,1 н КОН. Отриманий розчин являє собою прозору, сильно опалесцирующую рідина.

панкреатичний гідролізат. Панкреатин (300 мг) перемішують з 5 мл 2 розчину казеїну в 0,01 н КОН при 40 ° С протягом 40 хв. Отриманий розчин ферментного препарату Додають до основного кількості лужного розчину казеїну трьома рівними порціями через кожні 3 години. Після додавання останньою порції ферменту, розчин перемішують ще 15 год при 40 ° С і рН 8.

Обробка панкреатичного гідролізату пепсином. Після закінчення панкреатичного гідролізу розчин підкислюють 2 н сірчаною кислотою при інтенсивному перемішуванні до рН 2. Пепсин (300 мг) розчиняють при перемішуванні в 5 мл води і вводять в підкислений гідролізат трьома рівними порціями через кожні 3 години. Після додавання останньої порції ферменту реакційну суміш перемішують ще 15 год при 40 ° С і рН 2.

Після закінчення гідролізу в неї вводять по краплях насичений водний розчин гідроксиду барію до рН 7. Осад сульфату барію, що утворився відокремлюють центрифугуванням (5700g, 5 ° С, 10 хв) і видаляють. Супернатант концентрують до об`єму 150 мл, концентрований гідролізат лиофилизируют. Ліофілізований ферментативний гідролізат казеїну є білий аморфний порошок, легко розчинний у воді. Вихід - 28,5 г (95).

Отримання ферментативного гідролізату соєвого білка

Виділення соєвого білка. Насіння сої (375 г) подрібнюють в електричної млині, змішують з 1 л петролейного ефіру, перемішують протягом години при 20 ° С, осад відокремлюють центрифугуванням (5700g, 10 ° С, 5 хв). Знежирення соєвої муки повторюють ще два рази, після чого його висушують на повітрі. Вихід знежиреного борошна - 300 г (80). Отриману соєве борошно інтенсивно перемішують з 3 л дистильованої води протягом години при 20 ° С.

Частина, яка не розчинилася, відокремлюють центрифугуванням (5700g, 10 ° С, 30 хв) і відкидав, супернатант подкисляют по краплях 0,1 н соляної кислоти до рН 4,5 при перемішуванні і залишають на 1 год при 20 ° С. Осад відокремлюють центрифугуванням (5700 g, 10 ° С, 10 хв), промивають холодною водою (3 × 100 мл), супернатант і промивні рідини відкидають. Осад змішують з 0,5 л води, до суміші додають по краплях 0,1 н КОН до рН 8, освітлюють центрифугуванням (5700g, 10 ° С, 30 хв). Супернатант подкисляют 0,1 н соляною кислотою до рН 4,5, суміш перемішують протягом години при 20 ° С. Переосажденіем білок відділяють центрифугуванням (5700g, 10 ° С, 30 хв), промивають холодною водою (3 × 100 мл) і лиофилизируют. Вихід лиофилизированного білка - 30 г (10).

Приготування 2-го розчину соєвого білка. Ліофілізований білок (30 г) перемішують при 40 ° С з 1500 мл 0,01 н розчину КОН протягом 3 ч. Рівень рН розчину підтримують додаванням по краплях 0,1 н КОН в межах восьми. Потім розчин прогрівають на водяній бані (90-95 ° С, 30 хв) і охолоджують до кімнатної температури.

Обробка отриманого розчину панкреатином. Панкреатин (1г) розчиняють в 5 мл 2 розчину соєвого білка при перемішуванні протягом 40 хв. Отриманий розчин додають трьома рівними порціями до основного об`єму розчину соєвого білка через кожні 3 години. Тривалість гідролізу - 48 год (40 ° С, інтенсивне перемішування).

Обробка панкреатичного гідролізату пепсином. Після закінчення панкреатичного гідролізу, 2 н розчином сірчаної кислоти величину рН гідролізату доводять до двох. Потім 300 мг пепсину розчиняють в 5 мл води і додають трьома рівними порціями до гідролізату соєвого білка кожні 3 години. Тривалість гідролізу - 24 год при рН 2, 40 ° С і інтенсивному перемішуванні.

Величину рН розчину доводять до рН 7 додаванням насиченого водного розчину гідрату окису барію. Осад, видаляють центрифугуванням (5700g, 10 ° С, 10 хв), супернатант лиофилизируют.

Ліофілізований ферментативний гідролізат соєвого білка є жовтуватий аморфний порошок, розчинний у воді. Вихід - 20 г (66).

Обидва препарати ферментативних гідролізатів білків зберігаються в герметично закритій скляній тарі при 5 ° С до 12 місяців.

Отримання суміші ліпідів

У мінімальній кількості сірчаного ефіру, розчиняють 1 г холестерину, змішують з 5 г соєвого масла в 5 г соняшникової лецитину. Сірчаний ефір випарюють при температурі водяної бані не вище 40 ° С. Суміш можна зберігати при 5 ° С протягом одного року.

Отримання екстракту дріжджового

Від поживного субстрату центрифугуванням (5700g, 4 ° С, 20 хв) відокремлюють 1,8 кг біомаси пивних дріжджів (Saccharomyces cerevisiae) І двічі промивають холодною дистильованою водою. Автолиз проводять в 2,7 л води при 37 ° С (співвідношення біомаси дріжджів і води - 1: 1,5) протягом двох діб. Отриманий автолізат центрифугируют (5700 g, 4 ° С, 20 хв), фільтрують через бактеріальний фільтр і лиофилизируют. Вихід ліофілізірованого екстракту - 10 від маси сирих дріжджів.

Ліофільно висушений дріжджовий екстракт є коричневий гігроскопічний аморфний порошок, розчинний у воді без залишку. Термін зберігання при 5 ° С - не менше 12 місяців.

Отримання екстракту зародків пшениці

В електричної млині подрібнюють 330 г зародків пшениці, змішують з 0,9 л петролейного ефіру, перемішують протягом 2 год при 20 ° С. Осад відокремлюють центрифугуванням (5700g, 4 ° С, 10 хв). Знежирення зародків повторюють ще два рази, після чого їх висушують на повітрі. Вихід знежиреного борошна 100 г (30,3).

З дистильованою водою змішують 100 г знежиреного борошна зародків пшениці (співвідношення борошна і води - 1:10) і перемішують ще 4 ч при температурі 20 ° С. Осад відокремлюють центрифугуванням (5700 4 ° С, 20 хв), а потім ще раз екстрагують водою (співвідношення борошна і води - 1: 5). Промивні води об`єднують і лиофилизируют. Вихід ліофілізованого екстракту зародків пшениці - 41 г (41).

Ліофілізований екстракт зародків пшениці є білий аморфний порошок, легко розчинний у воді. Термін зберігання при 5 ° С - не менше 12 місяців.

Приготування живильних середовищ

середа 1. У 60 мл дистильованої води розчиняють 80 мг NaH2PO4 × 2H2O, 6 г сахарози або харчового цукру і 4,24 г екстракту дріжджового. Суміш витримують при кімнатній температурі протягом 3 год. Потім в ній розчиняють 4,32 г екстракту зародків пшениці, 4,8 г пептона, 0,25 мл 20-го розчину холіну-хлориду (50 мг), 1 мл розчину вітаміну В12 ( 0,004 мг), 100 мг вітаміну С, 24 мг барвника (нейтральний червоний), 120 мг емульгатора (твін-80) і 120 мг суміші ліпідів. Загальний обсяг живильного середовища доводять дистильованою водою до 120 мл.

Після додавання кожного інгредієнта суміш ретельно збовтують. Підсумкове перемішування проводять за допомогою електричного гомогенізатора (8000 об. / Хв, 2 хв). Гомогенізований живильне середовище фільтрують через скляний фільтр Шотта № 3. Готове середовище розфасовують в скляні ампули, запаюють і зберігають при температурі мінус 10 ° С. Допустимий термін зберігання в цих умовах - не більше 6 місяців.

Середовища II і III. Готують так само, як і середу I, але замість пептона вносять необхідну кількість ферментативного гідролізату казеїну.

середа IV. У 25 мл розчину вітаміну В2 (1 мг) розчиняють навішування мінеральних солей: К2НР04 × ЗН20 - 160 мг, MgS04 × 7Н20 - 50 мг, NaH2P04 × 2Н2О - 80 мг і 20 мг інозиту. Потім додають заздалегідь приготовані водні розчини вітамінов- 1 мл розчину суміші нікотинової кислоти і пантотената кальцію (по 2 мг кожен), 1 мл розчину суміші вітамінів B1 і В6 (по 0,5 мг кожного), 1 мл розчину біотину (0,04 мг ), 1 мл розчину вітаміну В12 (0,004 мг), 54 мл розчину фолієвої кислоти (0,5 мг), 0,25 мл 20-го розчину холіну-хлориду (50 мг) і 1 мл розчину FeS04 × Н20 (5 мг).

В отриманій суміші мінеральних речовин і вітамінів розчиняють 15 г сахарози або харчового цукру, 5 г ферментативного гідролізату казеїну, 5 г ферментативного гідролізату соєвого білка, 100 мг вітаміну С і 24 мг барвника-нейтрального червоного. Потім в суміш вносять 120 мг твін-80 і 550 мг суміші ліпідів. Загальний обсяг доводять дистильованою водою до 120 мл. Суміш перемішують, фільтрують і зберігають так само, як і попередні середовища.

Живильні середовища являють собою емульсію з питомою вагою близько 1,075 г / см3, не розшаровується протягом доби при 5 ° С.

Виготовлення оболонки капсули

Композицію оболонки готують наступним чином: 59,4 парафіну і 39,6 бджолиного воску розплавляють в металевому посуді на електричній плитці при 110-115 ° С, потім додають 1 олеїнової кислоти. Розплавлену масу фільтрують через шар вати, розфасовують і зберігають у металевій тарі захищаючи від проникнення пилу. Застиглий матеріал оболонки являє собою жовту аморфну ​​масу з температурою плавлення 85-90 ° С.

Під час масового виробництва златоглазки звичайної доцільно поживні середовища або компоненти середовищ і оболонку капсул виготовляти централізовано на спеціалізованому підприємстві.

Методика розведення златоглазки на Мікроінкапсульовані поживних середовищах

Розведення златоглазки на Мікроінкапсульовані поживних середовищах так само, як на будь-якому іншому вигляді корму, включає наступні основні процеси: зміст імаго, збір яєць златоглазки, інкубація яєць, приготування і мікроінкапсулірованіе штучних поживних середовищ, виховання личинок, одержання дорослих комах.

Зміст дорослих комах і збір яєць. Імаго міститься в циліндричних садках діаметром 20 см і висотою 10 см. Стінки роблять з тонкого вініпласту товщиною 3-4 мм або іншого відповідного матеріалу. Дном садка служить марля, складена в два шари, а кришкою - темна щільний папір. Дно і кришку садка фіксують гумовим кільцем.

Як корм для імаго використовують 40-й автолізат пивних дріжджів і мед з пилком, що сприяє підвищенню плодючості імаго.

Автолізат і мед наносять на окремі шматочки поролону розміром 30x20x5 мм, які потім підвішують у садках. Імаго, отриманих під час відтворення лабораторної популяції, перші чотири-п`ять днів після відродження варто годувати тільки медом, а потім медом і Автолізат дріжджів.

В одному садку утримують близько 100 пар комах. Плодючість однієї самки при такому годуванні і щільності складає в середньому 300 яєць за період яйцекладки (20-25 днів). підгодівлю імаго і збір яєць проводять загальноприйнятими методами не рідше одного разу на добу. Садки з дорослими комахами містять при 20-25 ° С і 70-80 відносної вологості в спеціальному приміщенні або боксі.

інкубація яєць. Яйця златоглазки, отримані за один день, розсипають в чашки Петрі і поміщають в термостат, в якому автоматично підтримується постійна температура 25 ± 1,5 ° С і відносна вологість повітря 75-80. В термостаті додатково встановлюють лампи денного світла і прилади контролю за тривалістю світлового дня. Такий термостат використовують також для виховання личинок і збереження імаго.

Одночасно з інкубацією яєць приступають до приготування поживних середовищ і їх капсулирования.

Приготування і мікроінкапсулірованіе поживних середовищ. Технологія приготування поживних середовищ приведена вище. Мікроінкапсулірованіе проводять на спеціальній установці, схема якої представлена ​​на рис.3.

Принцип дії установки полягає в наступному: охолоджена живильне середовище з резервуара 1 надходить під тиском у внутрішній канал вузла капсулирования 2. Одночасно з резервуара 3 в зазор між внутрішнім і зовнішнім каналами вузла 2, надходить розплавлений матеріал оболонки. Підтримка необхідних температурних режимів в резервуарах 1 і 3, в системах подачі оболонки 4 і живильного середовища 5 здійснюється ультратермостат 6 і 7. Необхідний тиск середовища і оболонки створюється за допомогою редуктора 8 і балона зі стисненим азотом 9. У вузлі капсулирования 2 досягається ефект освіти дворідинної струменя під дією сил поверхневого натягу і перепадів температур розпадається на окремі капсули з живильним середовищем. Капсули при падінні тверднуть і їх збирають в контейнер 10.

Оптимальний режим роботи установки: тиск в системі - 4,5 кг / см2, температура середовища - 8-12 ° С, температура оболонки - 85-90 ° С. Отримані мікрокапсули кулястої форми, діаметром 400-600 мкм, товщина оболонки 15-20 мк. Зміст живильного середовища в мікрокапсулах становить не менше 75-80 від загальної маси. Роботу на установці з мікроінкапсулірованія поживних середовищ проводять згідно з інструкцією по його експлуатації.

Мікрокапсули фіксують на скляних пластинах за допомогою клею, який являє собою 5-й водний розчин полівінілового спирту з добавкою азотнокислого срібла як антисептика.

Готують клей наступним чином: У скляній колбі з 700 мл дистильованої води розчиняють 50 г порошку полівінілового спирту (температура водяної бані 70-80 ° С). Готовий розчин полівінілового спирту охолоджують до кімнатної температури і вносять в нього 2 мл заздалегідь приготовленого 0,05 розчину азотнокислого срібла. Потім загальний обсяг доводять до 1000 мл. Клей можна зберігати в закритому посуді при температурі 3-7 ° С протягом двох місяців. Скляні пластини з приклеєними в один шар мікрокапсулами і поміщені в ексикатори можна зберігати в холодильнику протягом 10-12 днів при температурі 3-7 ° С і відносній вологості повітря 70-90 (в ексикаторах).

Перелік матеріалів, необхідних для приготування поживних середовищ і середовищ оболонки капсул:

1. пептон.
2. Ферментативний гідролізат казеїну.
3. Ферментативний гідролізат соєвого білка.
4. Екстракт зародків пшениці.
5. екстракт дріжджовий.
6. сахароза.
7. Соєва олія гідратована пресове.
8. соняшниковий лецитин.
9. холестерин.
10. Холін-хлорид.
11. Аскорбінова кислота.
12. Ціанкобаламін (В12).
13. Нікотинова кислота.
14. пантотенат кальцію.
15. тіамін хлорид.
16. Піридоксин хлорид (В6).
17. Рибофлавін (В2).
18. Фолієва кислота.
19. біотин.
20. інозит.
21. Фосфат натрію однозаміщений.
22. Фосфат калію двозаміщений.
23. Сульфат магнію.
24. Сульфат окисленого заліза.
25. Барвник-нейтральний червоний.
26. Твін-80.
27. парафін.
28. Бджолиний віск.
29. олеїнова кислота.
30. полівінілхлорид.
31. Метиловий ефір р-оксибензойной кислоти.

Догляд за личинками. Відродження і розвиток личинок відбувається в спеціалізованих садках, які складаються з двох пластин, розміром 18-24 см і паперової осередковою вкладкою між ними.

Паперові вкладки попередньо дезінфікують, занурюючи в спиртовий розчин МЕТАБО (метиловий ефір параоксибензойної кислоти) і сорбінової кислоти (в 1 л етилового спирту розчиняють 1 г МЕТАБО і 2 г сорбінової кислоти). Розчин готують заздалегідь і зберігають в холодильнику в посуді з притертою пробкою. Після обробки вкладки висушують протягом декількох годин в повітрі.

Яйця златоглазки після триденного витримування в термостаті рівномірно розсипають по осередках вкладок з розрахунку одне-два яйця на осередок. Садки з яйцями златоглазки поміщають назад в термостат, де підтримується 16-годинний світловий день. Після початку відродження личинок верхню пластину садка замінюють пластиною зі штучною інкапсульованою живильним середовищем. Для виховання личинок з моменту відродження до першої линьки досить змінити пластину з кормом один раз (через два-три дні після відродження). Вихід личинок другого віку, які використовуються для масового випуску в теплиці, становить 60-70.

Встановлено, що для отримання повноцінних дорослих комах і збільшення їх виходу необхідно личинок першого віку годувати яйцями зернової молі, а потім личинок другого і третього століть виховувати на штучному Мікроінкапсульовані живильному середовищі IV, яка найбільшою мірою задовольняє кормові потреби личинок цих століть. Пластини з капсульованих кормом змінюють так само, як і для першого віку, раз у два-три дня. Витрата яєць зернової молі при такій схемі відтворення популяції становить лише 8-10 від загальної потреби в кормі. Для виховання 1000 личинок першого віку необхідно витратити близько 35 г штучного корму (середовища I-III), для виховання личинок другого і третього століть під час відтворення популяції - 60-70 г (середа IV).

Отримання дорослих комах. Паперові вкладки з коконами через шість-сім днів після окукливания личинок переносять в садки для імаго. Відродження дорослих комах настає на восьмий-дев`ятий день. Вихід нормально сформованих імаго досягає 70. Комах, які вилетіли годують, як показано вище. Відкладання яєць зазвичай починається через шість-вісім днів після відродження імаго.