Методика збору і зберігання зразків фітопатогенних грибів і пошкоджених рослин

Збір і зберігання зразків пошкоджених рослин і грибів

Збору підлягають зразки рослин з добре вираженими ознаками хвороб і їх збудників. Трав`янисті рослини збирають цілком, включаючи квіти, плоди і корні- у дерев і кустарніков- переважно гілки з листям. Зазвичай збирають частини рослин, що мають ознаки ураження у вигляді нальотів, плямистостей, подушечок, здуття, деформацій, виразок і т. П., А також рослини без видимих ​​ознак паразита, але засихають або з раптово осипалися листям.

Зразки хворих рослин збирають з моменту сходів і до збирання врожаю. Об`єктами фитопатологических досліджень повинні бути рослини, які ростуть в поле, саду, городі, на лузі і в лісі. Необхідно обстежити також неосвоєні ділянки землі - цілину, поклад, болота і чагарники, так як багато дикі рослини служать проміжними господарями і переносниками хвороб культурних рослин. При цьому слід вивчати і перезимували частини рослин-на них можуть зберігатися зимуючі стадії (досконала і недосконала) багатьох патогенів, які є джерелом нової інфекції на початку вегетації.

Взимку доцільно проводити збір уражених частин рослин при обстеженні садів, а також овочесховищ і складів посадкового матеріалу.

Для отримання спороношения від склероциев, недорозвинених Перітеціі, різних стром і інших неспороносящіх форм грибів їх разом з частинами уражених рослин М. К. Хохряков (1969) рекомендує поміщати з осені на зимівлю в касети Клебан. Останні являють собою мініатюрні прессеткі, на дерев`яні рами яких натягують сітку з капрону або нержавіючої дроту. Досліджуваний зразок (листя, стебла і т. П.) Закладають в 2-рамкову касету. Між половинками складеної вдвічі одношарової фільтрувального паперу разом з етикеткою, написаної на пергаменті простим олівцем, пов`язують касету і залишають на поверхні грунту до весни. Важливо покласти касету так, щоб гриб в ній піддавався впливу всіх природних факторів: змочування і висушування, заморожування і відтавання, інсоляції і затемнення і т. Д.

Для перезимівлі в природних умовах поміщають гриб у вигляді чистих культур в пробірках, ватяні пробки яких обмотують пергаментним папером або калькою, затягнутою у верхнього кінця гумкою. В інших випадках залишають на зимівлю снопи трав`янистих рослин, підвішуючи їх до рейок.

Зразки уражених рослин відразу ж після збору закладають в ботанічну папку або сітку і відокремлюють один від одного фільтрувальної або газетним папером. Якщо зразки зів`яли, їх ретельно расправляют- ті з них, які не можуть бути закладені в ботанічну сітку (гілки, бульби, плоди і т. П.), Загортають у папір. Кожен зразок повинен бути забезпечений етикеткою, в якій вказують місце і дату збору, вид і сорт рослини, а також прізвище зібрав.

Якщо зразки призначають для гербарію, то їх поміщають в прессетку, попередньо відокремивши один від одного шаром прокладки паперу. У міру зволоження прокладочні папір замінюють сухий. У тих випадках, коли зразки не можуть бути висушені (соковиті плоди, коренеплоди та т. П.), Їх фіксують у консервують рідинах. Такими рідинами служать спирт (70-ний), формалін (5-ний), суміш спирту з формаліном, розчини кухонної солі (8-9-ні) або мідного купоросу (1-ний). Цими рідинами заливають зразки, поміщені в скляний посуд.

Для більш тривалого зберігання є кілька прописів. Найбільш споживані суміш сульфату міді (СіS04-5Н20) - 180 г з негашеним вапном (СаО) - 180 г і водою -22,7 л. Сульфат міді розчиняють протягом ночі в 2 л води. Вапно погашають в 20,7 л води і пропускають через тонке сито. Якщо немає негашеного вапна, то можна взяти 272 г гашеного вапна Са (ОН) 2 і обережно влити розчин сульфату міді в вапняне молоко. Це дає найбільш тонко зважений осад. Розчин використовують відразу після приготування.

розчин Кнопа складають з нітрату кальцій [Са (N03) 2] - 0,5 г, нітрату калію (KNO3) - 0,125 г, сульфату магнію (МgS04-7Н20) - 0,125 г, фосфату калію (К2НРО4) - 0,125 г, хлориду заліза (FeCl3 ) 5-ного - 1 крапля і дистильованої води-1 л.

Основний консервант для музейних зразків складають з формальдегіду (40-ного) - 25 мл, спирту (95-ного) - 150 мл і води - 1 л.

Для збереження зеленого забарвлення зразків їх поміщають в киплячу суміш з 1 частини крижаної оцтової кислоти, насиченої кристалічним ацетатом міді, і чотирьох частин води-кип`ятять 1-2 хвилини до тих пір, поки не повернеться зелений колір, і потім зберігають у 5-ому розчині формаліну.

Інший задовільний метод полягає в приміщенні матеріалу в 5-ий розчин сульфату міді не менше ніж на 6 годин і не більше ніж на 24 години. Потім зразки промивають водою і зберігають у розчині сірчистої кислоти (5-6 302) -2 мл з 1 л дистильованої води.

консервант Геслера для забарвлених фруктів складають з хлориду цинку (50 г), 40-ного формальдегіду (25 мл), гліцерину (25 г) і води (1 л). Для забарвлених грибів застосовують наступні склади: в разі, якщо в зразку містяться пігменти, нерозчинні у воді - ацетат ртуті (10 г), крижана оцтова кислота (5 мл) і вода (1 л) - при наявності розчинних у воді пігментів - ацетат ртуті (1 г), нейтральний ацетат свинцю (10 г), крижана оцтова кислота (10 мл) і 90-пий спирт (1 л) або сульфат цинку (25 г), 40-ний формальдегід (10 мл) і вода (1 л ).

Щоб уникнути випаровування рідин банки з фіксованими зразками накривають притертими пробками, звичайні пробки заливають парафіном. На кожну банку наклеюють етикетку.

Мікроскопічні препарати готують з лактофенолом і неколом. Лактофенол з аніліновим синім служить основним консервантом для постійних препаратів, які можуть бути гермітізіровани лаком для нігтів (краще наносити кілька тонких шарів). Перший шар повинен бути з безбарвного лаку, інакше барвник з лаку проникає в лактофенол. Останній шар з асфальтового лаку повинен надати велику фортецю. Підігрів препарату перед накладенням покривного скла прискорює забарвлення. Сухий пилоподібний матеріал слід спочатку зволожити етилацетатом.

Препарати з неколом часто виготовляють при вивченні грибів, що ростуть на поверхні субстрату. Некол або подібний препарат ацетату целюлози розводять ацетоном до консистенції гліцерину. Невелику краплю цієї рідини поміщають на колонію гриба і подсушівают- це зазвичай займає 15-30 хвилин. Тонку безбарвну плівку, що сформувалася до укладеного в ній грибом, після остаточного підсихання знімають скальпелем і поміщають між двома покривними стеклами в чистий гліцерин.

Деякі гриби утворюють ніжний конідіальной апарат. Щоб зробити хороші препарати, використовують культури на стеклах. При цьому вельми важливо дотримати умови стерильності і роботу ведуть під стерильними чашками Петрі, поверхня яких протирають спиртом, а всі інструменти, покривні і предметні скельця ретельно стерилізують.

Для створення культуральних блоків на предметних стеклах вирізують з агару в чашках Петрі шматок розміром 7 мм 2, інокуліруют мінімальною кількістю суперечка з кожного боку, закривають покривним склом і поміщають у вологу камеру (пристрій камери описано нижче). Коли культура досягає зрілості, частина спор і спороносних структур прикріплюють до предметного і покривному склі. Агаровий блок видаляють і роблять препарати, додаючи лактофенол- зразки зі структурами гриба на предметних стеклах накривають покривним склом, яке закріплюють. Уникнути забруднення з повітря можна обережним нагріванням.

Метод використання покривних стекол передбачає зростання гриба в їх центрі. Для цього чашку Петрі заливають сприятливим середовищем і дають їй застигнути. Потім роблять два діаметральньх розрізу агару під прямим кутом обпаленим скальпелем. Отримані трикутники агару підносити і під кожен з них з країв підкладають обпалені покривні скла, які потім замінюють. Чашку перевертають і розташування стекол, чільне через скло чашки, обводять восковим карандашом- в центрі стекол обмежують олівцем чотирикутні ділянки зі сторонами 6-8 мм. Потім чашку знову перевертають, непотрібні шматочки агару вирізають і видаляють, при цьому обведені квадрати просвічують крізь агар. Середу інокуліруют і чашку ставлять в інкубатор. В кінцевому підсумку гриб росте і поширюється по відкритій поверхні кожного скла, в чому можна переконатися під бинокуляром. При достатньому поширенні гриба покривні скла видаляють з вирізкою навколишнього агару (пошкоджуючи гіфи, якщо потрібно) і роблять звичайним способом препарати.

У разі, якщо необхідно переслати свіжі зразки, надходять у такий спосіб: відразу ж після збору їх поміщають в такі умови, щоб вони не псувалися в дорозі. Стебла і черешки пересилають в свіжому, злегка вологому моху, плоди загортають у папір і перекладають стружкою і т. П. Дрібні зразки пересилають в паперових пакетах. Не можна покористуватися поліетиленову плівку для тривалого зберігання та пересилання зразків, так як в пакеті з такого матеріалу створюється велика вологість і зразки швидко загнивають.